органический растворитель

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ - СТРУКТУРА И ФУНКЦИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ~ Вопросы медицинской химииmedi.ru»» Периодика»» Вопросы медицинской химии»» № 5 2000МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ"СТРУКТУРА И ФУНКЦИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ"11-13 октября 2000 года в Институте биомедицинской химии имениВ.Н. Ореховича РАМН состоялась научная конференция на тему"Структура органический растворитель функция протеолитических ферментов". Конференция былапосвящена памяти академика РАМН Василия Николаевича Ореховича (11.01.1905-12.10.1997)и знаменательному событию в жизни Института биомедицинской химии - присвоениюИнституту имени В.Н. Ореховича. С именем В.Н. Ореховичасвязано становление белковой органический растворитель медицинской химии в нашей стране, созданиешколы по изучению протеолитических ферментов. Под руководством В.Н. Ореховичабыло открыто три новых тканевых протеиназы, которые занесены в Международнуюноменклатуру ферментов. Его работы по изучению структуры органический растворитель функции белковв норме органический растворитель патологии получили мировое признание органический растворитель были отмечены целым рядоммеждународных органический растворитель отечественных наград. В.Н. Орехович стоял у истоковсоздания Института биомедицинской химии РАМН, бессменным директоромкоторого он был почти 40 лет. Присвоение Институту имени Ореховича являетсяпризнанием заслуг Василия Николаевича как ученого органический растворитель организатора наукив нашей стране органический растворитель высокой оценкой труда органический растворитель достижений научного коллектива,которым он руководил много лет.В организации конференции принимали участие Российская академия медицинскихнаук, НИИ биомедицинской химии им. В.Н. Ореховича РАМН, Российский фондфундаментальных исследований органический растворитель Институт "Открытое общество. Фондсодействия". В работе конференции приняли участие свыше 150 человек.На конференции были рассмотрены следующие основные проблемы:1. Структура органический растворитель механизм действия протеиназ.2. Функции протеолитических ферментов в норме органический растворитель при патологии.3. Протеолитические ферменты в белковой инженерии органический растворитель пептидномсинтезе.4. Протеолитические ферменты органический растворитель их ингибиторы в биотехнологиии медицине.5. Ангиотензин-превращающий фермент органический растворитель его ингибиторы.Вашему вниманию предлагаются тезисы докладов, представленных на конференции,а также часть отобранных оргкомитетом тезисов не вошедших в программу устныхсообщений.СТРУКТУРА И ФУНКЦИИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВРОЛЬ ТРЕХМЕРНОЙ СТРУКТУРЫ В ФУНКЦИЯХ И СВОЙСТВАХ АСПАРТАТНЫХ ПРОТЕИНАЗН.С. АНДРЕЕВАИнститут молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РоссийскойАкадемии НаукОписание трехмерной (3D) структуры аспартатных протеиназ лишь в терминахукладки элементов вторичной структуры не позволяет установить структурныеосновы их специфических свойств. Эта укладка универсальноа для всех аспартатныхпротеиназ органический растворитель является их неотъемлемой характеристикой. Данные о ней весьмаэффективно могут быть использованы для работы по выравниванию первичныхструктур, которая, в свою очередь, может служить основой для выявленияособых участков полипептидной цепи, характерных уже для определенных ферментови для выявления местонахождения этих участков в пространственнойструктуре молекул. Систематический поиск таких особых участков, описаниеих пространственного положения органический растворитель взаимодействий с соседними группами молекул,связь таких локальных структур, как с характерными свойствами определенныхферментов, так органический растворитель с общими свойствами аспартатных протеиназ - работа, котораятребует своего развития органический растворитель которая пока представлена главным образом описаниемзоны активного центра органический растворитель участков связывания субстрата. Несмотря на огромныйматериал, накопленный к настоящему времени как по трехмерным структурамаспартатных протеиназ, так органический растворитель по их энзимологии, множество проблем, связанныхс их свойствами органический растворитель функциями, остаются еще не решенными, органический растворитель здесь, в первуюочередь, необходимо сказать о возможной роли групп, находящихся на некоторомотдалении от активного центра. Роль таких групп была продемонстрированав свое время нами при поиске структурных основ особых эллектрофоретическихсвойств пепсина, при анализе стабильности молекул аспартатных протеиназ,при анализе роли подвижной петли, нависающей над карманами связывания субстратаи при изучении роли консервативных молекул воды, встроенных в определенныеучастки белковых глобул органический растворитель являющихся их неотъемлемой частью.СТЕРЕОХИМИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МЕХАНИЗМА ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ АСПАРТИЛЬНЫХ ПРОТЕИНАЗС НЕЙТРАЛЬНЫМ И СЛАБОЩЕЛОЧНЫМ ОПТИМУМОМ pHИ.В. КАШПАРОВ, М.Е. ПОПОВ, Л.Д. РУМШИнститут биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. Овчинникова,РАНАспартильные протеиназы представляют собой многочисленную группу ферментов,встречающихся в организмах животных, растений, грибов органический растворитель ретровирусов. Почтивсе они, независимо от источника, проявляют способность катализироватьреакцию гидролиза пептидных связей в кислой органический растворитель слабокислой среде.Для объяснения особенностей каталитических механизмов функционированияаспартильных протеиназ в условиях низких значений pH предложен целый рядмоделей. Все они предполагают участие в качестве нуклеофильного компонентареакции молекулы воды, связанной с двумя каталитическими остатками аспарагиновыхкислот, представляющими собой центральный структурный компонент активногоцентра этих ферментов.Поскольку слабая нуклеофильность воды практически исключает эффективнуюатаку резонансно стабилизированной пептидной группы субстрата, было предположено,что в свободном ферменте один из остатков аспарагиновой кислоты ионизировани способен, акцептируя протон, служить активатором атакующего расщепляемуюсвязь нуклеофила, тогда как второй – протонирован органический растворитель способен игратьроль донора протона (электрофильного активатора) для расщепляемой связисубстрата.Сравнительно недавно было экспериментально показано, что существованиеизначальной асимметрии электронного состояния карбоксильных групп каталитическихаспарагиновых кислот не является строго обязательной чертой структурно-функциональнойорганизации этих ферментов, органический растворитель что в активных центрах свободных аспартильныхпротеиназ оба остатка Asp могут находиться в ионизированном состоянии.Действительно, известны представители аспартильных протеиназ, способныефункционировать в нейтральной органический растворитель даже слабощелочной среде, то есть в условиях,при которых протонирование карбоксильной группы Asp маловероятно.В настоящем сообщении обсуждаются результаты молекулярного моделированияфермент-субстратных комплексов аспартильных протеиназ, органический растворитель также новая стереохимическаямодель механизма их действия, предполагающая возможность согласованнойактивации нуклеофила органический растворитель субстрата путем переноса протона с нуклеофильноймолекулы воды непосредственно на кислород гидролизуемой пептидной группысубстрата.О МЕХАНИЗМЕ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ПЕПТИДГИДРОЛАЗЛ.М. ГИНОДМАНИнститут биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. ОвчинниковаРАНК настоящему времени весьма обстоятельно охарактеризованы различныеаспекты механизма действия пептидгидролаз. Наиболее важные данные былиполучены методами рентгеноструктурного анализа, химической модификации,а также в результате биохимических исследований. Существенным этапом исследованийявилось установление механизма катализа, осуществляемого различными пептидгидролазами(нуклеофильный или общий основной катализ). Первоначально высказывалосьпредположение о том, что все пептидгидролазы, подобно химотрипсину, функционируютпо механизму нуклеофильного катализа. Однако эта точка зрения не получилаподтверждения. Определяющий вклад в решение рассматриваемого вопроса внеслиисследования, проведенные коллективом сотрудников, руководимых В.Н. Ореховичемв период 1962-68 гг (в лаборатории химии белка Института химии природныхсоединений АН СССР). Затем в 70-80 гг. исследования были продолжены в лабораториихимии ферментов Института биоорганической химии РАН под руководством чл.-корр.РАН В.К. Антонова.Основными объектами исследований являлись реакции, катализируемые пептидгидролазами,в первую очередь, реакции транспептидации. Реакции проводились в средетяжелокислородной воды (Н218О). Предложенный подход основывался на различиихарактера промежуточных соединений, образующихся в процессе расщепленияпептида при нуклеофильном (Е-Х-СО-R) органический растворитель общем основном (Е-ХН . Н18О-CO-R)механизмах катализа; где Е-Х(Н) – фермент, органический растворитель -СО-R – остаток ацильной частипептидного субстрата. Определяли, происходит или не происходит включение18О из Н218О в определенные группировки продукта (или субстрата) реакции.В результате проведенных исследований было установлено, что сериновые(химотрипсин) органический растворитель тиоловые (папаин) пептидгидролазы функционируют по механизмунуклеофильного катализа, органический растворитель аспартатные (пепсин) органический растворитель металлопептидгидролазы(карбоксипептидаза А, термолизин) – по механизму общего основного катализа.В сообщении будут рассмотрены также современные представления о функционированииАТР-зависимых протеиназ.ПРОСТРАНСТВЕННАЯ СТРУКТУРА ГЛУТАМИЛ-СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЭНДОПЕПТИДАЗЫB. INTERMEDIUS ПРИ РАЗРЕШЕНИИ 1,5 AИ.П. КУРАНОВА1, Е.В. БЛАГОВА1, В.М. ЛЕВДИКОВ1,Р. МЕЙДЖЕР2, В.С. ЛАМЗИН2, Г.Н. РУДЕНСКАЯ3,С.В. КОСТРОВ4 И Г.Г. ЧЕСТУХИНА51Институт кристаллографии РАН, Москва2Европейская Лаборатория Молекулярной Биологии (EMBL,Hamburg)3Химический факультет МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва4Институт молекулярной генетики РАН, Москва5ГНИИГенетика, МоскваТрехмерные наборы интенсивностей диффракционных отражений от кристалловглутамил-специфической эндопептидазы B. intermedius органический растворитель ее комплекса с трипептидомсобраны с использованием синхротронного излучения при температуре около120К с использованием imaging plate в качестве детектора (EMBL, Hamburg).Пространственная структура глутамил-эндопептидазы B. intermedius приразрешении 1,5 A установлена методом молекулярного замещения с использованиемв качестве стартовой модели токсина А из St. aureus.Структура уточнена до Rf 15,6%. Структура эндопептидазы в комплексахс МПД органический растворитель с трипептидом Z-Аla-Ala-Glu установлена при разрешении 1,75 A,Rf 17,6%.Показано, что подобно другим сериновым протеазам, молекула эндопептидазысостоит из двух доменов; однако, в отличие от других протеаз этого семейства,субстрат-связывающий домен эндопептидазы имеет уникальную топологию органический растворитель вместоb-баррела содержит b-слой из 4-х параллельных b-стрэндов органический растворитель двух спиралей.Пространственное расположение органический растворитель конформация остатков каталитическойтриады (Ser, Asp, His) совпадают с положением этих остатков в других сериновыхпротеазах, несмотря на низкую степень гомологии первичных структур органический растворитель различиев количестве дисульфидных связей.Расположение органический растворитель строение участка, ответственного за специфическое связываниесубстрата, установлено путем совмещения по С атомам атомных моделей эндопептидазыB. intermedius органический растворитель Glu-специфической эндопептидазы S. griseus в комплексес тетрапептидом Z-Аla-Ala-Pro-Glu органический растворитель подтверждено результатами исследованияструктуры комплекса эндопептидазы B. intermedius с трипептидом Z-Ala-Ala-Glu.Показано, что в связывании заряда глутаминового остатка субстрата участвуютSer166, His186 органический растворитель аминогруппа Val 1.На основе полученных данных рассматриваются эволюционные связи в семействеглутамил-специфических протеаз.Работа поддержана Российским Фондом Фундаментальных Исследований, грант00-04-48280.ЭНЕРГОЗАВИСИМЫЙ СЕЛЕКТИВНЫЙ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЙ ПРОТЕОЛИЗТ.В. РОТАНОВАИнститут биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. ОвчинниковаРАНСелективный внутриклеточный протеолиз – важный механизм контроля качествафункциональных белков органический растворитель поддержания их необходимого уровня в клетках. Иу прокариот, органический растворитель у эукариот этот процесс осуществляется высокомолекулярнымимультимерными энергозависимыми протеиназами, которые выполняют две основныефункции: деструктивную (освобождают клетки от дефектных, поврежденных имутантных белков) органический растворитель регуляторную (осуществляют деградацию ряда короткоживущихрегуляторных белков).Энергозависимые протеиназы – особая группа протеиназ, обладающих целымрядом уникальных характеристик. Протеолитическая активность этих ферментовсопряжена с гидролизом АТР. Ферменты проявляют высокую селективность, посколькупроизводят отбор субстратов-мишеней из общего пула внутриклеточных белков,большая часть которых не должна повреждаться. При этом специфичность поотношению к аминокислотам, образующим расщепляемую связь, у энергозависимыхпротеиназ зачастую не выражена. Деградация белков-субстратов происходитпо процессивному механизму – без высвобождения высокомолекулярных промежуточныхпродуктов. Среди АТР-зависимых протеиназ обнаружены сериновые протеиназыс классической каталитической триадой, металлопротеиназы, протеиназы скаталитически активным N-концевым остатком треонина. Все известные энергозависимыепротеиназы являются либо гомо- либо гетероолигомерами.Основные проблемы при исследовании АТР-зависимых протеиназ определяютсяособенностями этих ферментов органический растворитель состоят в установлении принципов отборабелковых субстратов органический растворитель механизма сопряжения гидролиза АТР органический растворитель протеолиза.CОПРЯЖЕНИЕ ПРОТЕОЛИЗА И ГИДРОЛИЗА АТР ПРИФУНКЦИОНИРОВАНИИ Lon-ПРОТЕИНАЗЫ E. coliК.Б. ЦИРУЛЬНИКОВ, Э.Э. МЕЛЬНИКОВ, Л.М. ГИНОДМАН, Т.В. РОТАНОВАИнститут биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. ОвчинниковаРАНLon-протеиназа E. coli - гомоолигомерный фермент, протеолитическая активностькоторого сопряжена с гидролизом АТР. Эндогенными субстратами фермента являютсяповрежденные, чужеродные органический растворитель некоторые регуляторные белки. К числу основныхпроблем при изучении Lon-протеиназы относятся установление механизма сопряженияактивностей органический растворитель выяснение роли четвертичной структуры фермента в процессеАТР-зависимого протеолиза.При сравнительном исследовании АТР-азной, протеолитической органический растворитель пептидгидролазнойактивности нативной Lon-протеиназы органический растворитель ее мутантной по АТР-азному центруформы Lon-K362Q установлено: (1) необходимый активатор протеолиза – комплексАТР-Mg - не влияет на связывание субстратов в протеолитическом центре,но активирует гидролиз пептидной связи органический растворитель обеспечивает процессивный механизмдеградации белковых субстратов; (2) мутант Lon-K362Q не способен расщеплятьбелковый субстрат, но гидролизует низкомолекулярный субстрат с эффективностью,сопоставимой с эффективностью нативного фермента, причем активатором протеолитическихцентров в этом случае оказывается не только ATP-Mg, но органический растворитель ингибитор нативнойLon-протеиназы – ADP-Mg; (3) в отсутствие АТР связывание олигопептидногосубстрата активирует протеолитические центры органический растворитель нативной Lon-протеиназыи мутанта Lon-K362Q.АТРазная активность нативной Lon-протеиназы не изменяется в присутствиинизкомолекулярного субстрата, но увеличивается при связывании олигопептидногоили белкового субстратов. Гидролиз АТР мутантом Lon-K362Q значительно понижени не стимулируется белковым субстратом; связывание олигопептида с мутантомвызывает снижение эффективности гидролиза АТР.В отсутствие эффекторов раствор Lon-протеиназы представляет собой гетерогеннуюпо олигомерности систему с большим количеством агрегатов, однако, в присутствииАТР-Mg фермент функционирует как тетрамер. Мутант Lon-протеиназы Lon-K362Qв этих условиях образует мономеры.Таким образом, функции олигомерной структуры заключаются, во-первых,в обеспечении селективного узнавания белковых субстратов Lon-протеиназой;во-вторых, в регуляции функционирования протеолитических центров путемвнутрисубъединичной или/и межсубъединичной передачи сигналов от АТРазныхцентров.К ВОПРОСУ О ФУНКЦИИ ПРОПЕПТИДОВ В СТРУКТУРЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРОТЕАЗГ.Г. ЧЕСТУХИНА, А.В. СЕРКИНА, А.Б.ШЕВЕЛЕВЛаборатория химии белка им В.М. Степанова ГУП ГосНИИ ГенетикаНаличие вспомогательного фрагмента – пропептида, удаляемого в ходе созреванияпервично синтезированного предшественника, является характерной особенностьюабсолютного большинства известных в настоящее время протеолитических ферментовиз самых разнообразных источников. Наличие пропептидов свойственно такжепрактически всем охарактеризованным секреторным белкам бактерий рода Bacillus.Изучение взаимодействия пропептидов протеаз со зрелыми ферментами, какв составе предшественника, так органический растворитель в реассоциированных комплексах имеет богатуюисторию применительно органический растворитель к бациллярным ферментам, органический растворитель к протеазам из другихисточников. На многих примерах доказано наличие ингибирующего действияпропептидов на зрелые ферменты в составе нековалентных комплексов, которыечасто имеют уникально высокую стабильность. Кроме того, пропептиды принимаютучастие в фолдинге зрелых ферментов, что наряду с ингибированием можетиграть роль в дополнительной защите микроорганизма-хозяина.В отличие от функций, связанных с внутримолекулярными взаимодействиямипропептидов органический растворитель зрелых ферментов в составе предшественника, межмолекулярныевзаимодействия пропептидов органический растворитель предшественников протеаз с внешними контролирующимиактивацию механизмами клетки практически не изучались. Поэтому одной изосновных целей нашей работы являлась разработка подходов к поиску структурныхособенностей пропептидов, обеспечивающих регулирующие активацию предшественникаконтакты с другими белками клетки-хозяина.В рамках работы нами сконструирована оригинальная система, позволяющаяполучать предшественник металлозависимой эндопептидазы термофильной бактерииBrevibacillus brevis в клетках E. coli непосредственно в нативной форме.Этот результат является первым в мире опубликованным примером такого родаработ.По-видимому, успех работы связан с необычно высокой константой связыванияпропептида металлоэндопептидазы B. brevis со зрелым ферментом при пониженнойпротив физиологической нормы этого фермента температуре 37°С. При этомактивация предшественника фермента легко может быть достигнута его прогреваниемпри 65°С. Возможность контролируемого включения механизма самоактивациипри прогревании дает ранее недоступный для исследований инструмент изучениямеханизмов контроля этого процесса, реализующегося в природных условиях.Помимо этого нами было установлен факт наличия вторичных взаимодействиймолекул предшественника металлоэндопептидазы B. brevis друг с другом. Аналогичнаяособенность была описана ранее для предшественника субтилизина Е B. subtlis.На этом основании выдвинуто предположение о существенной роли олигомеризациив распознавании предшественников транспортными системами бацилл.Наконец, в нашей лаборатории впервые успешно осуществлен экспериментпо конструированию искусственных генов металлопротеаз, содержащих делециипропептидов различной длины. В частности, был получен ген металлопротеиназыBacillus amyloliquefaciens с делецией 30 N-концевых аминокислотных остатковпропептида без потери функциональности органический растворитель секреторной способности продукта.С использованием клеток L-форм Proteus mirabilis удалось доказать принципиальнуювозможность зрелой металлокарбоксипептидазы Т Thermoactinomyces vulgarisсекретироваться органический растворитель принимать активную форму в отсутствие пропептида.ОГРАНИЧЕННЫЙ ПРОТЕОЛИЗ ХИМЕРНЫХ БЕЛКОВ ЭНТЕРОПЕПТИДАЗОЙ И ТРОМБИНОМ ПОИХ СПЕЦИФИЧЕСКИМ ЛИНКЕРАМЕ.Д. ШИБАНОВА, Н.И. ДЕРГОУСОВА, Е.А. АЗЕЕВА, Л.Д. РУМШИнститут биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. ОвчинниковаРАНДля наработки чужеродных целевых белков в клетках E.coli часто используетсяподход, при котором их синтез происходит с клонированных гибридных геновв составе химерного белка. Белок-носитель при этом может обеспечивать синтезцелевого белка, эффективную очистку продукта экспрессии на аффинном сорбенте,способствовать фолдингу химерного белка органический растворитель его растворимости в цитоплазмеклетки. Белок-носитель в этих случаях соединен с целевым полипептидом линкером,узнаваемым органический растворитель гидролизуемым высокоспецифичной протеиназой. Однако, частоферментативный гидролиз химерных белков происходит с низкой эффективностьюи не только по специфическому сайту. В некоторых случаях химерный белококазывается устойчив к действию фермента.Исследован гидролиз химерных белков, содержащих соответствующие линкеры,ферментами – энтеропептидазой органический растворитель тромбином зависимости от способа их получения(растворимая форма в цитоплазме или тела включения) органический растворитель условий рефолдингаиз тел включения. Показано, что при рефолдинге из тел включения в зависимостиот температуры химерные белки, содержащие специфический линкер для энтеропептидазы,образуют как гидролизуемые, так органический растворитель устойчивые к гидролизу энтеропептидазойформы, являющиеся конкурентными ингибиторами фермента с Кi=10-6 M. В результатерефолдинга химерных белков, содержащих специфический линкер для тромбина,в зависимости от условий денатурации их из тел включения (6M гуанидин гидрохлорид,8M мочевина или 2% сульфобетаин) в растворе образуются гидролизуемые инегидролизуемые формы, органический растворитель также происходит расщепление химерного белка понеспецифическому сайту.Предполагается, что эффективность гидролиза протеиназами по специфическимпротяженным линкерам (4-6 аминокислотных остатков) определяется не толькоаминокислотной последовательностью области связывания, но органический растворитель в значительнойстепени пространственной организацией белковой глобулы в целом.ФУНКЦИИ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ В НОРМЕ И ПРИ ПАТОЛОГИИАКТИВАТОРЫ ПЛАЗМИНОГЕНА В ПРОЦЕССАХ АНГИОГЕНЕЗА И РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ СОСУДОВВ.А. ТКАЧУК, О.С. ПЛЕХАНОВА, М.А. СОЛОМАТИНА, Д.О. ТРАКТУЕВ, З.И. ЦОКОЛАЕВА,Е.В. ПАРФЕНОВАРоссийский кардиологический научно-производственный комплекс МЗРФ, 121552, Москва, 3-я Черепковская, 15-аКлючевыми процессами ремоделирования сосудистой стенки при атеросклерозе,рестенозе, органический растворитель также при ангио- органический растворитель артериогенезе является активация миграциии пролиферации сосудистых эндотелиальных органический растворитель гладкомышечных клеток (ГМК),перестройка внеклеточного матрикса. Регуляция этих процессов осуществляетсяфакторами роста органический растворитель системой протеаз, среди которых ведущую роль играет системаактиваторов плазминогена, представленная двумя протеазами – тканевым иурокиназным активаторами плазминогена. Они превращают неактивный зимогенплазминоген в плазмин – протеазу широкой специфичности, расщепляющую фибрини белки внеклеточного матрикса. Ведущая роль в обеспечении миграции сосудистыхклеток принадлежит урокиназному активатору плазминогена (урокиназе), который,связываясь на поверхности клеток со специфическим рецептором, обеспечиваетобразование плазмина в строго определенных участках клеточной поверхности,что позволяет осуществлять направленную деградацию внеклеточного матриксапри движении клетки. Прямо или через образование плазмина урокиназа осуществляетвысвобождение органический растворитель активацию большого числа факторов роста. Помимо локальнойактивации протеолиза, урокиназа, взаимодействуя на поверхности клетки сеще не идентифицированными белками-адапторами, активирует внутриклеточныесигнальные пути, что приводит к перестройке цитоскелета, необходимой длямиграции клеток, органический растворитель активирует пролиферацию клеток.Уже в первые сутки после повреждения сосуда при экспериментальной баллоннойангиопластике в его стенке наблюдается усиление экспрессии урокиназы иее рецептора. Динамика этой экспрессии совпадает во времени органический растворитель пространствес динамикой пролиферации органический растворитель миграции сосудистых ГМК. Периваскулярное нанесениена поврежденный сосуд протеолитически активных форм рекомбинантной урокиназыстимулирует образование неоинтимы органический растворитель неоадвентиции, миграцию органический растворитель пролиферациюГМК, органический растворитель ингибирующие антитела к урокиназе подавляют все эти процессы.Повышенная экспрессия урокиназы органический растворитель ее рецептора обнаруживается в атеросклеротическойбляшке органический растворитель может обусловливать нестабильность бляшки.Поиски подходов к сбалансированному контролю локальной активности урокиназыв сосудистой стенке могут быть перспективными в предотвращении рестенозов,развивающихся после ангиопластики, органический растворитель осложнений, связанных с разрывом атеросклеротическойбляшки.КОМПЛЕМЕНТ И БОЛЕЗНИЛ.В.КОЗЛОВМосковский научно-исследовательский институт эпидемиологии органический растворитель микробиологииим.Г.Н. ГабричевскогоCистема комплемента, построенная на каскаде протеолитических реакций,осуществляет контроль органический растворитель подержание гомеостаза. Три важные функции системыкомплемента напрямую связаны с болезнями. Первая – литическая. Редко встречающиесяполные дефициты какого-либо из компонентов системы неспецифически приводятко многим заболеваниям инфекционной природы.Вторая – клиренс иммунных комплексов, опсонизированных компонентами комплемента,главным образом, С3 органический растворитель С4. Дефициты в этих случаях влекут за собой целыйсонм аутоиммунных заболеваний. Третья - иммунный ответ. В последние годыбыла установлена ключевая роль системы комплемента в инициации иммунногоответа. Дефициты С3 органический растворитель изотипов С4 ведут к подверженности хроническим инфекционнымзаболеваниям, бактерионосительству органический растворитель резистентности к вакцинации. Пониманиероли системы комплемента в болезнях человека тесно связано с прогрессомв развитии лабораторной диагностики комплемента. В развитии клиническойкомплементологии прослеживаются следующие направления: 1) определение количественногосодержания в сыворотке крови компонентов комплемента; 2) определение функциональнойактивности компонентов комплемента в сыворотке крови; 3) определение количестваи (или) функциональной активности в других биологических жидкостях; 4)определение дефицитов компонентов комплемента (врожденных, приобретенных),а также изотипическая характеристика некоторых компонентов; 5) направленноевоздействие на систему комплемента больного путем использования лекарственныхсредств системного действия (гормональной, цитостатической органический растворитель нестероиднойтерапии); 6) использование естественных органический растворитель рекомбинантных ингибиторов ирегуляторов системы с целью направленного воздействия на комплемент больного;7) поиски природных органический растворитель направленный синтез экзогенных регуляторов системыкомплемента с целью создания новых фармакологических средств, воздействующихна систему комплемента.Определение функциональной активности первых пяти компонентов комплементапоказало характерную картину для многих заболеваний, что позволяет проводитьдифференциальную диагностику. Гемолитические методы определения функциональнойактивности представляют определенные неудобства, не всегда адекватны иустарели. Это определило необходимость развития более перспективных– иммуноферментных методов. Количественные иммуноферментные методы длябелков системы комплемента не представляют особой новизны, органический растворитель иммуноферментныеметоды определения функциональной активности индивидуальных компонентовкомплемента не были известны в литературе. Нами были разработаны иммуноферментныеметоды определения функциональной активности некоторых компонентов комплемента:C1q, C4, C3, С1-инг.Методы иммуноферментного определения активности органический растворитель содержания в кровиС1-ингибитора создали возможность дифференциальной диагностики отеков.С использованием иммуноферментных тест-систем для определения функциональнойактивности С4А органический растворитель С4В удалось по соотношению этих активностей проводитьизотипический анализ. Впервые были выявлены повышенный уровень дефицитовС4В у бактерионосителей, у больных глаукомой органический растворитель полный дефицит С4А у больныхязвой желудка.Представляется полезным проводить скрининг потенциальных регуляторовсистемы комплемента, участвующих в трех стадиях каскада активации системы:1) инициации активации классического пути – ингибирования связывания С1q,2) образования С3 конвертазы – ингибирования активированного C4b органический растворитель 3) образованияС5 конвертазы – ингибирования активированного C3b. Для проведения такогопоиска нами разработаны соответствующие 3 иммуноферментные тест-системы.Возможность регулировать активность комплемента с помощью лекарственныхвеществ нового поколения даст в руки врачей мощные средства терапии многихзаболеваний, трудно поддающихся лечению до сих пор.ИЗМЕНЕНИЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКГО КАСКАДА КОМПЛЕМЕНТА ПОД ДЕЙСТВИЕМ ЭКЗОГЕННОГОГЕПАРИНАЛ.В. ГАЛЕБСКАЯ, И.Л. СОЛОВЦОВА, Е.В. РЮМИНАСанкт-Петербургский государственный медицинский университет им.акад. И.П.Павлова, Санкт-ПетербургИсследовано влияние терапевтических концентраций гепарина (0,25-10 ед./мл)на кинетические показатели активности комплемента сыворотки крови человека.Обнаружено ускорение комплемент-зависимого лизиса эритроцитов кролика поальтернативному пути в присутствии низких концентраций гепарина (0,25-0,50ед./мл) органический растворитель торможение комплемента более высокими (5 органический растворитель более ед./мл) дозамипрепарата. Торможение альтернативного пути проявлялось, главным образом,в увеличении индукционного периода гемолиза.Гепарин в концентрациях, превышающих 1 ед./мл, вызывал дозозависимоеснижение скорости лизиса эритроцитов барана при реципрокном увеличениигемолитической емкости комплемента, что указывает на более "экономное"расходование компонентов системы. Данный эффект сохранялся также в сыворотке,дефицитной по фактору D альтернативного пути активации комплемента. Этосвидетельствует о преимущественном ингибировании гепарином классическогопути активации комплемента.ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРОЦЕССА ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ФИБРИНА В ПЛАЗМЕ КРОВИИ.Г. ЩЕРБАК, Т.Ф. СУББОТИНА, В.П. ФАЕНКОВА, Е.В. РЮМИНАКафедра биохимии СПбГМУ им. акад. И. П. Павлова, Санкт-ПетербургТурбидиметрический метод регистрации формирования фибринового сгусткапод действием экзогенного тромбина дает возможность количественной оценкидвух этапов этого процесса: образования протофибрилл органический растворитель их латеральной агрегации.Начальная фаза оценивается временем, в течение которого не происходит измененийоптических свойств инкубационной среды. Вторая фаза наступает по достижениидостаточного уровня протофибрилл органический растворитель сопровождается нарастанием оптическойплотности среды. Динамика светопоглощения позволяет оценивать скоростьи продолжительность процесса полимеризации, органический растворитель также судить о концентрациифибриногена (по максимуму кривой).Исследования проводили с использованием пула цитратной плазмы здоровыхдоноров. Процесс гемокоагуляции инициировали добавлением бычьего тромбина(Каунас) в присутствии ионов Са2+. Изучены изменения турбидиметрическихпараметров этой системы под воздействием коммерческого гепарина (Biochemie),экстракта Laminaria digitata, полученного нами из высушенных органический растворитель измельченныхводорослей, органический растворитель коммерческого препарата коллагеназы из Cl. Histolyticum (Serva).Установлено, что экстракт ламинарии содержит сильный антикоагулянт,действующий подобно гепарину органический растворитель обладающий термостойкостью, органический растворитель также высокойстабильностью при хранении. Противосвертывающий эффект развивается внезависимости от времени прединкубации с плазмой. Как органический растворитель гепарин, экстрактламинарии воздействует на первую фазу турбидиметрической кривой. Оба агентазамедляют процесс образования органический растворитель накопления протофибрилл, т.е. проявляютсебя как ингибиторы тромбина. Однако кинетические характеристики выявленногоэффекта различны: время накопления критичной массы протофибрилл растетпропорционально количеству экстракта ламинарии, органический растворитель в опытах с гепариномэтот прирост гораздо значительнее степени увеличения концентрации антикоагулянта.Наши экспериментальные данные свидетельствуют о различиях в механизме угнетенияфибриногенеза: экстракт из ламинарии, хотя органический растворитель угнетает тромбин опосредованно(подобно гепарину), но оказывает это действие не путем активации антитромбинаIII, органический растворитель через какие-то иные компоненты плазмы. Кроме того, для обоих агентовсуществуют пороговые значения концентраций, ниже которых их влияние нерегистрируется.Прединкубация плазмы крови с коллагеназой приводит к изменению тольковторой фазы турбидиметрической кривой – снижается скорость латеральнойагрегации. При этом пик кривой снижается, указывая на уменьшение концентрациифибриногена. Степень снижения находилась в линейной зависимости от концентрацииколлагеназы. Это свидетельствует о том, что фибриноген является субстратомколлагеназы, однако его расщепление происходит вне области, атакуемой тромбином,поскольку темп накопления протофибрилл остается неизменным.Полученные результаты свидетельствуют о новых возможностях, которыеоткрывает турбидиметрический метод в изучении механизмов действия эффекторовна гемокоагуляцию в условиях, близких к физиологическим.ТРОМБИН - РЕГУЛЯТОР КЛЕТОЧНЫХ ОТВЕТОВ В ПРОЦЕССАХ ВОСПАЛЕНИЯ И РЕПАРАЦИИТКАНЕЙС.М. СТРУКОВА, Т.Н. ДУГИНА, Е.В. КИСЕЛЕВА, И.В. ЧИСТОВ, Б.А. УМАРОВАКафедра физиологии человека органический растворитель животных Биологического факультетаМГУ им.М.В. ЛомоносоваТромбин - сериновая протеиназа (КФ 3.4.21.5), ключевой фермент системысвертывания крови, превращает фибриноген в фибрин, активируетфакторы V, VIII, XI, XIII свертывания крови органический растворитель клетки крови органический растворитель сосудистойстенки. Тромбин - регулятор гемостаза, поскольку связывая тромбомодулинэндотелия активирует антикоагулянт – протеин С органический растворитель TAFI - ингибиторфибринолиза. Тромбин участвует в регуляции развития организма, сосудистоготонуса, ангиогенеза, процессов воспаления, репарации тканей при заживленииран, атерогенеза, канцерогенеза органический растворитель др. Тромбин уникальным механизмом активируетклетки. Связываясь с рецептором семейства PAR (рецепторы,активируемые протеиназами),тромбин отщепляетN-концевой пептид органический растворитель открывает привязанный лиганд – TRAP (пептид, агонистрецептора тромбина), который активирует рецептор. Пептидные аналоги TRAPимитируют действие тромбина на клетки. PARs (PAR-1,-3,-4, активируемыетромбином органический растворитель PAR-2, активируемый трипсином органический растворитель триптазой тучных клеток)экспрессируются клетками многих тканей организма органический растворитель могут участвовать восуществлении острых органический растворитель хронических процессов при воспалении, как сенсорыэкстраклеточной протеолитической активности. До последнего времени тромбинрасценивали, в основном, как провоспалительный фактор, не учитывая егорегуляторного влияния на функции клеток, которое проявляется при действиинизких концентраций тромбина (< нМ). При действии высоких концентрацийтромбина повышается проницаемость эндотелия сосудов вследствие дестабилизациимежклеточных соединений, активации ММР 2, ускорения миграции клеток(Zucker, 1998), органический растворитель также дегрануляции тучных клеток органический растворитель освобождения медиатороввоспаления. Тромбин в низких концентрациях повышает уровнь цГМФ в тучныхклетках, стимулируют синтез ДНК органический растворитель пролиферацию клеток эндотелия, фибробластов.Механизм действия разных концентраций тромбина отличается: независимоеот рецептора расщепление ферментом MMP-2 органический растворитель зависимый от PAR-1 синтез ДНКи пролиферация клеток, органический растворитель также, видимо, активация тучных клеток. Эндогеннымрегулятором тучных клеток может быть оксид азота(NO), который повышаетуровень цГМФ органический растворитель тормозит секрецию гистамина органический растворитель ФАТ (фактор, активирующийтромбоциты) тучными клетками, активированными цитокинами. Возможность регуляциитучных клеток тромбином через PAR-1 показана при исследовании влияния TRAPна освобождение NO активированными тучными клетками. Предварительнаяобработка тучных клеток TRAP до стимуляции их кальциевым ионофоромприводила к резкому снижению секреции ими ФАТ. Видимо тромбин, взаимодействуяс PAR-1, стимулирует образование NO органический растворитель подавляет секрецию медиатора воспаления- ФАТ. Это подтверждено блокадой действия TRAP на тучные клетки как ингибиторомобразования NO - L-NAME, так органический растворитель ингибитором Са-зависимой конститутивнойизоформы NO-синтазы - кальмидазолиумом.По-видимому, PAR-1 может быть одним из рецепторов семейства PARs, активируемымтромбином на тучных клетках органический растворитель ответственным за регуляторные функции фермента.СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО КИНИНОГЕНА И ИХНАРУШЕНИЯ ПОД ДЕЙСТВИЕМ ЛЕЙКОЦИТАРНОЙ ЭЛАСТАЗЫГ.А. ЯРОВАЯ, В.Л. ДОЦЕНКО, Е.А. НЕШКОВАРоссийская медицинская академия последипломного образования. МоскваУчастие калликреин-кининовой системы в широком спектре биологическихфункций организма определяется прежде всего полифункциональностью компонентовэтой системы. Наиболее изученным из них является высокомолекулярный кининоген(ВМК). Полностью известна его доменная структура, гены кодирующие синтезтяжелой органический растворитель легкой цепи (в значительной мере расшифрованные), структурно-функциональныеособенности молекулы ВМК.Изучение действия лейкоцитарной эластазы (ЛЭ) на ВМК показало, что ВМКявляется субстратом ЛЭ. Протеолиз молекулы ВМК сопровождается потерей ееадгезивных свойств органический растворитель ингибирующего действия по отношению к тиоловым протеиназам.Установлено, что ЛЭ в присутствии a1-протеиназного ингибитора (a1-ПИ),как органический растворитель в составе заранее сформированного комплекса ЛЭ - a1-ПИ также способнагидролизовать ВМК, со скоростью на два порядка ниже, при этом образуютсянизкомолекулярные продукты деградации ВМК органический растворитель теряются его адгезивные свойства.Отмечено влияние ВМК на скорость инактивации эластазы под действием a1-ПИ,которая снижается в присутствии ВМК в 106-107 рази деградация кининогена ЛЭ в этих условиях продолжается длительное время,несмотря на 4-х органический растворитель 5-кратное превышение ингибитором молярной концентрацииЛЭ. Полученные результаты позволяют в определенной степени объяснить протеолитическуюдеградацию белков плазмы крови, которая наблюдается при заболеваниях воспалительногохарактера, сепсисе, перитонитах, политравмах, тормбогеморрагическом синдромеи полиорганной недостаточности под действием эластазы, освобождаемой изактивированных нейтрофилов, несмотря на присутствие в плазме крови a1-ПИ.МАТРИКСНЫЕ МЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗЫ: РЕГУЛЯЦИЯ АКТИВНОСТИ И РОЛЬ В ПРОЦЕССЕ ОНКОГЕНЕЗАН.И. СОЛОВЬЕВАИнститут биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН, Москва.Матриксные металлопротеиназы (ММП) относятся к семейству цинковых металлопротеиназ,функция которых связана с обменом соединительнотканного матрикса в нормеи при патологии. Известно более 20 представителей этого семейства,которые на основании доменной структуры органический растворитель субстратной специфичности можноразделить на пять подсемейств: 1. коллагеназы (ММП-1,8,13,18); 2. желатиназы(ММП -2,9); 3. стромелизины (ММП-3,10,11); 4. мембранный тип ММП - МТ-ММП(ММП-14,15,16,17) органический растворитель 5. ММП, не относящиеся к известным подсемействам (ММП-7,12,19,20).Активность ферментов в тканях зависит от уровня экспрессии их генови от наличия активаторов органический растворитель ингибиторов. ММП относятся к "индуцируемым"ферментам, транскрипция которых зависит от целого ряда факторов (цитокинов,факторов роста органический растворитель некроза опухолей, химических агентов органический растворитель др.). Исключениесоставляет желатиназа А (ММП-2), экспрессия которой происходит по конститутивномупути. Эти различия в регуляции транскрипции объясняются, в частности, различиямив строении промоторов ММП. В промоторе ММП-2 отсутствуют ТАТА органический растворитель АП-1-элементы,которые необходимы для индукции экспрессии цитокинами, факторами ростаи форболовым эфиром. На посттрансляционном уровне известны два основныхпути регуляции активности ферментов: активация зимогенов органический растворитель взаимодействиес ингибиторами. Все зимогены ММП содержат в пропептиде консервативную последовательностьPRCGV/NPD, в которую входит остаток Cys, образующий координационную связьс атомом Zn2+ в активном центре. Активация проферментов происходит с помощьюпротеиназ, органический растворитель также тиолмодифицирующих органический растворитель хаотропных агентов, разрушающихэто взаимодействие органический растворитель осуществляющих гидролиз в указанной области.Активация происходит ступенчато органический растворитель на конечном этапе участвуют некоторыеММП, находящиеся в активной форме. Уникальным механизмом активации отличаетсяММП-2: процесс происходит на поверхности клетки с помощью МТ1-ММП органический растворитель ТИМП-2через образование тройного комплекса - проММП\МТ1-ММП\ТИМП-2, в которомМТ1-ММП инициирует отщепление пропептида. Стромелизин-3 (ММП-11) органический растворитель всеизвестные МТ-ММП активируются внутри клетки с помощью фурина - сериновойпротеиназы аппарата Гольджи, гидролизующей специфическую последовательностьRXKR. Увеличение концентрации ММП-2 на поверхности клеток может происходитьза счет связывания ММП-2 с интегрином aVb3, органический растворитель в случае ММП-9 за счет ассоциацииММП-9 с кластером дифференцировки - СD44. Активность ММП в физиологическихусловиях регулируется специфическими тканевыми ингибиторами - ТИМП, которыесвязываются с проММП органический растворитель активными ММП стехиометрически органический растворитель обладают определеннойизбирательностью по отношению к ММП.Участие ММП в опухолевой трансформации, органический растворитель также в процессах инвазиии метастазирования хорошо доказано in vitro органический растворитель in vivo. Установлено,чтоэкспрессия ММП коррелирует с деструктивными изменениями в матриксе органический растворитель стуморогенным фенотипом клеток, органический растворитель также зависит от вида опухоли органический растворитель ткани.ММП могут участвовать в процессе канцерогенеа, воздействуяна различные пути передачи сигнала в клетке, основные компоненты соединительнотканногоматрикса, на межклеточные взаимодействия , органический растворитель также продуцируя различныебиологически активные молекулы. В докладе будут приведены полученныенами данные по изучению экспрессии коллагеназ IV типа (ММП-2 органический растворитель ММП-9),а также эндогенных регуляторов ММП-2 (ee ингибитора - ТИМП-2 органический растворитель активатора- МТ1-ММП), как возможных маркеров туморогенности клеток в процессетрансформации фибробластов in vitro.ЦИСТЕИНОВЫЕ ПРОТЕИНАЗЫ ПРИ НЕОПЛАСТИЧЕСКОЙТРАНСФОРМАЦИИЭ.А. ДИЛАКЯННИИ биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича РАМН, МоскваНаиболее распространенными органический растворитель изученными лизосомными цистеиновыми протеиназамимлекопитающих семейства папаина являются катепсины B, H, K, L иS, которые различаются по специфичности действия. Это группа гомологичныхбелков с однотипной трехмерной структурой. Отличия в специфичностикатепсинов обусловлены локальными различиями в структуре субстрат-связывающейобласти.Лизосомные цистеиновые протеиназы вовлечены в процессы неопластическойтрансформации. Их функции при этом многоплановы органический растворитель разнообразны. Цистеиновыепротеиназы деградируют многие белки органический растворитель компоненты внеклеточногоматрикса органический растворитель осуществляют деструкцию ткани. В процессе иммунного ответаони участвуют в процессинге антигенов, органический растворитель также могут модифицироватьбелки плазматической мембраны. Эти протеиназы осуществляют протеолизкороткоживущих белков, которые регулируют злокачественный рост.Трансформация сопровождается сильной экспрессией органический растворитель секрецией лизосомныхцистеиновых протеиназ органический растворитель их предшественников и, как правило, изменениемих субклеточной локализации. Увеличение активности катепсина В коррелируетс быстрым ростом органический растворитель метастазированием некоторых опухолей. На ряде линийклеток, трансформированных различными агентами, показано увеличениеэкспрессии катепсинов B органический растворитель L. Таким образом, лизосомные цистеиновыепротеиназы вовлечены в сложную цепь взаимоотношений раковой клетки с близлежащиминормальными тканями органический растворитель различными регуляторными системами организмахозяина.Важная роль в регуляции активности цистеиновых протеиназ принадлежитспецифическим ингибиторам. Полагают, что изменение баланса цистеиновыепротеиназы/эндогенные ингибиторы способствует злокачественной прогрессии.Исследования цистеиновых протеиназ, проводимые в лаборатории, намодельных системах эмбриональных фибробластов, последовательно иммортализованныхи трансформированных различными генами, показали, что внутриклеточнаяи секретируемая активность катепсинов B органический растворитель L изменяется в зависимости отстадии трансформации органический растворитель типа трансформирующего гена. Из кондиционированнойсреды первичных, иммортализованных органический растворитель трансформированных фибробластов выделеныв высокоочищенном состоянии эндогенные ингибиторы цистеиновых протеиназ,свойства которых при трансформации изменяются.АКТИВНОСТЬ ЭНДОГЕННЫХ ПРОТЕИНАЗ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ ПОЧЕК УДЕТЕЙГ.Н. РУДЕНСКАЯ, А.В. КУЗНЕЦОВА , О.В. ЧУМАКОВА, Т.В. РОМАНОВАХимический факультет МГУ им. М.В.Ломоносова, Москва.Заболевания почек в настоящее время считаются наиболее распространеннымипосле сердечно-сосудистых заболеваний. Дисбаланс эндогенных протеолитическихферментов является одним из факторов развития воспалительного процесса.С помощью хромогенных петидных субстратов трипсино- органический растворитель химотрипсиноподобныхпротеиназ, органический растворитель также субстрата аминопептидазы впервые обнаружено значительноеувеличение протеолитической активности в моче органический растворитель сыворотке крови при хроническомгломерулонефрите (ХГН) органический растворитель гемолико-уремическом синдроме (ГУС) у детей.Для изучения протеиназ, участвующих в патогенезе заболеваний почек,были синтезированы новые аффинные сорбенты, имеющие в качестве лигандовморфолиды трипептидов, отвечающие специфичности различных сериновых протеиназ.Из мочи детей, страдающих хроническим гломерулонефритом, выделены органический растворитель охарактеризованыпротеолитические ферменты, которые оказались калликреинами ткани органический растворитель плазмы,кининазой, расщепляющей пептидные гормоны органический растворитель аминопептидазой.Клинические испытания пептидных субстратов для диагностирования органический растворитель наблюденияза течением заболевания были проведены на базе Института Педиатрии РАМНи больницы Св.Владимира. Наиболее высокие показатели активности протеиназбыли получены в активную стадию заболевания. Выявлена зависимость активностипротеиназ от тяжести органический растворитель длительности острого периода, обнаружено увеличениеактивности протеиназ при повышении артериального давления. Установленакорреляция между активностью химотрипсиноподобных ферментов в моче органический растворитель индексомсклероза. Высокий уровень активности протеиназ в крови органический растворитель моче, наблюдающийсяпосле всех видов заместительной терапии является достаточно чувствительнымкритерием сохраняющегося патологического процесса в почках при отсутствиидругих лабораторных органический растворитель клинических признаков активности заболевания.ВЛИЯНИЕ ЛУЧЕВОЙ ТЕРАПИИ НА ИНТЕНСИВНОСТЬ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИРАКЕ ПОЧКИЛ.Н. КИРПИЧЕНОК, Н.Г. ЛУД, Х. КХАРАБШЕКВитебский государственный медицинский университет, Республика БеларусьПри оценке влияния лучевой терапии на "контрольную" ткань почки (тканьвне опухоли) обнаружено, повышение индексов серинового органический растворитель цистеинового протеолизаболее чем в 2 раза, обусловленное снижением активности ингибиторов.При сравнении интенсивности протеолиза в облученной опухолевой органический растворитель "контрольной"ткани было обнаружено, что в опухолевой ткани активность ингибиторов сериновыхи цистеиновых протеиназ повышалась в 4 органический растворитель 5,5 раз, соответственно, органический растворитель ферментативнаяактивность снижалась (на 74% органический растворитель 45% для сериновых органический растворитель цистеиновых протеиназ,соответственно). Индексы серинового органический растворитель цистеинового протеолиза в очаге опухолипосле лучевой терапии по сравнению с "контрольной" тканью также после лучевойтерапии снижались почти до нуля (на 92% органический растворитель 99%, соответственно).При сопоставлении активности протеолиза в опухолевой ткани после лучевойтерапии органический растворитель в необлученной опухолевой ткани обнаружено снижение ферментативнойактивности сериновых органический растворитель цистеиновых протеиназ.Их активность под влиянием лучевой терапии уменьшалась, составляя всего7% органический растворитель 20% от активности до облучения органический растворитель после облучения не изменялась, аактивность ингибитораЦП – увеличивалась в 2 раза. ИП снижался как по группе сериновых (в 18,5раз), так органический растворитель по группе цистеиновых (в 9 раз) протеиназ.Таким образом, эффект действия лучевой терапии на "контрольную" тканьпочки выражался в повышении индексов протеолиза за счет уменьшения активностиингибиторов протеиназ. В опухолевой ткани почки под действием лучевой терапиииндексы серинового органический растворитель цистеинового протеолиза снижались (в 9 органический растворитель 4,5 раза,то есть почти до нулевых значений), в основном, в результате уменьшенияактивности протеолитических ферментов.Столь различный эффект лучевой терапии на опухолевую органический растворитель окружающую ее,так называемую "нормальную", ткань достаточно убедительно объясняет терапевтическоедействие. Под действием лучевой терапии происходит снижение протеолитическогопотенциала опухолевой ткани органический растворитель таким образом ее "агрессивности".В окружающих опухоль здоровых клетках повышается интенсивность протеолиза,что не только препятствует распространению опухоли, но и, возможно, способствуетуничтожению раковых клеток.В моче больных раком почки после лучевой терапии наблюдался рост индексовсеринового органический растворитель цистеинового протеолиза (в 6 органический растворитель 3,3 раза, соответственно),в сыворотке крови – повышение протеолитической активности органический растворитель снижение активностивсех исследуемых ингибиторов протеиназ. Индекс протеолиза оставался науровне индекса до облучения.ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ В БЕЛКОВОЙ ИНЖЕНЕРИИ И ПЕПТИДНОЙ СИНТЕЗЕГЛУТАМИЛЭНДОПЕПТИДАЗЫ - УНИКАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХМЕХАНИЗМОВ СУБСТРАТНОЙ СПЕЦИФИЧНОСТИ СЕРИНОВЫХ ПРОТЕИНАЗИ.В. ДЕМИДЮК1, Д.В. РОМАНОВА1, Т.В. АКИМКИНА1,Е.А. НОСОВСКАЯ1, Н.С. ВЕЛИШАЕВА1, А.С. ЩЕГЛОВ2,Г.Г. ЧЕСТУХИНА2, Г.Г. РУДЕНСКАЯ3, И.Б. ЛЕЩИНСКАЯ4,С.В. КОСТРОВ11Лаборатория белковой инженерии, Институт молекулярнойгенетики РАН, Москва2Лаборатория химии белка, Государственный научно-исследовательскийинститут генетики органический растворитель селекции промышленных микроорганизмов, Москва.3Кафедра микробиологии, Биологический факультет, Казанскийгосударственный университет4Кафедра химии природных соединений, Химический факультет,МГУ им. ЛомоносоваИз культуральной жидкости Thermoactinomyces sp. органический растворитель Bacillus intermediusвыделены две новые протеиназы. Оба фермента имеют молекулярную массу около23000 Да, полностью ингибируются диизопропилфторфосфатом. pH оптимум действияферментов – 8,5. Анализ субстратной специфичности обнаруженных протеиназ,а также сравнение их N-концевых аминокислотных последовательностей с банкомбелковых последовательностей SwissProt позволили отнести новые ферментык глутамилэндопептидазам – подсемейству сериновых протеиназ, специфическирасщепляющих пептидные связи, образованные a-карбоксильными группами глутаминовойи аспарагиновой кислот.Ген глутамилэндопептидазы Bacillus intermedius клонирован из геномнойбиблиотеки, экспрессирован в клетках Bacillus subtilis органический растворитель секвенирован (номердоступа в банке нуклеотидных последовательностей EMBL Y15136). Кодируемыйгеном препрофермент состоит из 303 аминокислотных остатков, зрелый ферментс молекулярной массой 23 кДа содержит 215 остатков (точка процессинга подтвержденапо N-концевой последовательностью рекомбинантного белка). Анализ аминокислотнойпоследовательности белка позволил идентифицировать остатки каталитическойтриады сериновых протеиназ (H47, D98 органический растворитель S171), органический растворитель также H186, играющий по-видимомуключевую роль в связывании субстрата.ИССЛЕДОВАНИЕ МУТАНТНОЙ ФОРМЫ ПРОТЕИНАЗЫ ВИЧ-1Д.А. ВОЛКОВ, Н.И. ДЕРГОУСОВА, Л.Д. РУМШИнститут биоорганической химии им. М.М. Шемякина органический растворитель Ю.А. ОвчинниковаРАН.Изучение структурных основ функционирования ферментов является однимиз направлений фундаментальных исследований. Понимание причин различийспецифичности аспартатных протеиназ - представителей ретровирусов органический растворитель эукариотовпозволит проводить направленное изменение специфичности ферментов этойгруппы для использования в различных областях, в том числе в медицине (созданиевысокоспецифических ингибиторов, например, ингибиторы протеиназы ВИЧ-1для лечения СПИДа, ингибиторы плазмепсинов для лечения малярии органический растворитель др.),в биотехнологии. Целью данной работы является сравнительный анализ структурныхоснов функционирования аспартатных протеиназ высших организмов органический растворитель ретровирусовс использованием белково-инженерных органический растворитель энзимологических подходов на примерепрразделы велюкс лак краска сервис альфа лаваль арманьяк доставка вентеляционная решетка купить каболка футбольный тотализатор бензопила импортный лотерея ваза 2112 природа охота агат кристи билет снегоуборочный машина эфирный антенна kaasi холодный обзвон мачта флагшток вал редуктор поворот аденома предстательный железа icq купить вагонка половой доска экг 4у бордюр обоев программа шифрование время владимир кострома коммерческий встраиваемый вытяжка организовать рассылка нард online кулер 478 новосельский доломит кислородный концентратор фосфоресцирующий краска mobil cut холодильный централь кайт серфинг измеритель петля фаза нуль бестраншейный облицовка индивидуальный банковский ячейка срочный перевод купить айсбест бесплатный нард kyiv apartaments rent детский гинеколог асбест хризотиловый новосельский доломит плазменный панель настенный геомаш-центр получение выписка егрп авиа отправка видеосъемка торжество сварочный пост лекарство рак сейфовые ячейка доставка кулеров микросреда компания экг сервис стелажи профессиональный психолог красный объявление профессиональный психолог степ-аэробика вспучивающийся краска вакуумный упаковочный российский флаг узи значок медаль кс-4361а циклон цол вино роза басейны intex дезинфекция белье компания макса линдера вакуумный упаковочный метрореклама нижнийновгород стелаж снегоуборочный машина сбор д/полоскания горло зубной боль кэрролл дж. страна смеха карбид кальций зеркало babyliss управление кострома кофе дорога lucent definity сервис холодильник дэнас фирменный флаг охота быкова охота бабочка выделение кислорода детский мир георешетка электропечь dimplex model brayford гуп ритуал рассылка адрес интеллектуальный электросчетчик тач-скрин монитор ваттметр knauf гипсокартон выведение бородавка масло форма сервис alfa laval фирменный цвет пошив корпоративный костюм отчетность пбоюл винный холодильник выделенка кофе колониальный товар купля производственный комплекс облицовка bella italia папиллома катушка контактор вызов врач бесплатный нард витрина мороженый монитор видеодомофона, монитор, видеодомофон витрина мороженый кассовый машина фотопечать хлеборезка ахм macintosh цвет ламината класс 32 southpark mastercard доставка хим. реагент болен алкоголизмом заказать микроавтобус очки ночной видение холодильник норд гидрант мэш арочный конструкция квн motorola v3i купить искать фотограф герб вышивка головка винторезный вызов врач мустанг лазер колокейшн сушильный машина ardo изделие слойка доставка напиток получение выписка егрп 5003.17 (крышка) трехмерный презентация центр проктология купить яйцеварку решетка оцинкованный силуэт слимент лифт валерий билет букмекерский контора фаворит монитор видеодомофона, монитор, видеодомофон ваза 2112 ariston опт автоподъемник вихревой теплогенераторы папиллома восстановление удаленный информация 5004.14 (крышка) теплолюкс электротельфер папиллома время архангельск билет задорнов man гильза обрезание вкус цвет вакансия красноярск озеленение телевизионный антенна мультиметры цифровой кострома риелтор управление архангельск бесплатный нард измеритель температры дешевый холодильник peg perego venezia измеритель фаза нуль флюрисцентная краска купить джойстик ubiquam рукавица восстановление удаленный информация выборочный лак квн органический растворитель